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常识【飞诺美色谱】牛奶中甲砜霉素的分析方法

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　　【飞诺美色谱】牛奶中甲砜霉素的分析方法
　　
　　摘要：本验重现了 GB 29689-2022 ，样品经乙酸乙酯提取，Cleanert AQ C18 固相萃取柱净化， Venusil XBP C18 (L)色谱柱（4.6 × 250 mm，5 μm，150 ) 分离，水和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，甲砜霉素添加量为 2.0 mg/kg 时，回收率在 90% ~ 100%之间，能够满足检测要求。
　　
　　关键词:甲砜霉素；Venusil XBP C18 (L)色谱柱；Cleanert AQ C18；Cleanert PEP
　　
　　前言
　　
　　服用甲砜霉素可发生腹痛、腹泻、恶心、呕吐等消化道反应，其发生率在 10%以下；偶见皮疹等过敏反应；早产儿及新生儿中尚未发现有灰婴综合征者。仅有个例报道有出现短暂性皮肤和面色苍白；本品亦可引起造血系统的性反应，主要表现为可逆性的红细胞生成抑制；白细胞和血小板减少；发生再生障碍性贫血者罕见。
　　
　　因此通过有效的验技术手段，对牛奶中的有关甲砜霉素残留进行监控，以确保消费者对牛奶消费的安全具有重要意义。
　　
　　本验通过优化前处理方法建立了甲砜霉素在牛奶中的高效液相色谱的检测方法。
　　
　　验部分
　　
　　仪器、试剂与材料
　　
　　主要仪器设备
　　
　　高效液相色谱仪（紫外检测器）；博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。
　　
　　试剂材料
　　
　　乙酸乙酯、乙腈、正己烷为色谱纯；验用水为超纯水；甲砜霉素标准品（纯度 99%）；
　　
　　一次性菌注器；PTFE-Q 针式过滤器(0.45 μm，直径 13 mm)；
　　
　　CleanertAQ C18 固相萃取柱：500 mg/3 mL Cleanert PEP 固相萃取柱：200 mg/6 mL。
　　
　　样品制备
　　
　　样品提取
　　
　　称取牛奶 5 g 于 50 mL 离心管中，加乙酸乙酯 20 mL,振荡 10 min，4000 r/min 离心 5 min,取上清液于鸡心瓶中，残渣加乙酸乙酯 20 mL,重复提取一次，合并两次提取液，于 45℃旋蒸至近干，加水 5 mL 于鸡心瓶中，超声 5min 充分溶解，转至 50 mL 离心管中，再加水 5 mL 于鸡心瓶中重复溶解后转至同一离心管中。加 20 mL 正己烷，振荡 5 min ，4000 r/min 离心 2min，取下层液待净化。
　　
　　样品净化
　　
　　先将小柱分别用 5 mL 乙腈，5 mL 水溶液活化平衡，然后将待净化液过柱，弃去全部流出液并挤干，比较后用 5 mL 乙腈洗脱。收集洗脱液于 45℃氮气吹干，用 1 mL 水溶解残留物，过 0.45 μm PTFE-Q 针式过滤器后待测。
　　
　　以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
　　
　　验条件
　　
　　液相条件
　　
　　色谱柱：Venusil XBP C18 (L) ，5 μm ，150 , 4.6 × 250 mm 流动相：乙腈︰水=20 ︰ 80
　　
　　柱温：35℃ 进样量：20 μL
　　
　　检测波长：225 nm
　　
　　结果与讨论
　　
　　验结果
　　
　　由表 1 可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测甲砜霉素，两款小柱加标回收率
　　
　　均在 90% 以上，能够满足标准要求，并且 Cleanert PEP 效果更佳。